更新时间：作者：小小条
免疫荧光就是用被荧光标记的抗体跟目标蛋白结合，所以，我们在荧光显微镜等设备中得到的图像，其中五颜六色的荧光就是被标记的目标蛋白。也就是说，我们可以看到：
那么，我们知道这些信息有什么用呢？
我们在这边找了篇文章，研究的是使用某种海带提取物处理小鼠的原代神经元细胞，看海带提取物是否能够调节与多巴胺（DA）和血清素（5-HT）传递相关的分子表达，以及影响神经元的结构形成。
好，这文章天然提取物和神经科学全沾了，要素过多。
然后这个文章的作者们认为：多巴胺和血清素作为两种主要的神经递质，广泛参与多种精神疾病以及神经发育早期过程中的神经元生长调控。
所以为了探讨了这个海带提取物到底有没有相关功能，就要看经过提取物处理的神经元中相关的关键蛋白质（如下面他们测试的DRD2、SERT）表达量是否发生变化。
于是这篇文章选择了免疫荧光作为检测蛋白质表达的手段。
这里有一个小问题：为什么不用流式呢？一方面，在这里，他们可能有对蛋白质进行定位的需求，这一点流式做不到；另一方面，这个研究不需要精确到单细胞分辨率，而且样本量没有大到需要流式的程度。
以下摘录作者的材料与方法：
实验采用从妊娠14天的CD-1小鼠胚胎大脑皮层中分离获取的神经元，在体外进行培养。
将培养的细胞分别用浓度为0.1、1.0和10.0 μg/mL的海带提取物处理24小时，随后进行荧光免疫染色，检测与多巴胺和血清素相关的受体及转运蛋白，以及一些与神经元结构形成相关的关键分子。
然后就来到了读图环节。
我们可以看到一共有三种颜色：绿色（目标蛋白嘉宾一号）、红色（目标蛋白嘉宾二号）、蓝色是DAPI，这个染的是细胞核，用于给细胞核定位，这样我们比较容易知道目标蛋白相对细胞核的位置。
（按道理来说这里应该再提供一组Merge图，像下图最右这样，把不同荧光蛋白的照片叠加在一起共定位，不知道为什么这篇文章没做。）
回到这篇文章的实验结果。
我们可以看到：每一组图（A~G）中，横向的四组分别是对照组（VEH）、经过不同浓度（0.1、1.0 和 10.0 μg/mL）的海带提取物处理24小时后；纵向的三排是该组细胞的三种荧光，也就是细胞核和两种目的蛋白。
光看荧光信息，怎么知道对蛋白质表达量有没有影响呢？
这就需要用ImageJ软件对这些图像中的荧光信号进行离线定量分析。也就是荧光强度越强，相关蛋白表达量越高。
如果荧光强度的变化与海带提取物处理有确切的关系，那就说明海带提取物对目标蛋白可能构成影响。
作者提供的荧光强度的计算方法是：将具有荧光信号的细胞数量除以该图像中所有经DAPI染色的细胞总数。
在这里，我们引用原文的结果：
该海带提取物能显著影响DRD1的表达水平，但对其他多巴胺受体（DRD2~5）无明显作用。
事后多重比较的贝叶斯Student’s T检验显示，该海带提取物对DRD1表达的影响具有剂量依赖性：在1.0 μg/mL时，DRD1表达显著升高，而在0.1或10.0 μg/mL浓度下，则与对照组无显著差异。
此外，DAT蛋白表达在10.0 μg/mL 该海带提取物处理的细胞中也显著降低，而其他剂量则未见此现象，与VEH处理组相比具有统计学差异。
然而，TH蛋白表达水平在海带提取物处理组与对照组之间未见显著差异。
因此，该海带提取物呈剂量依赖性地上调了特定多巴胺和血清素受体的表达水平，并显著下调了多巴胺和血清素转运蛋白的表达量。
此外，该海带提取物还增强了神经丝轻链的表达。这些结果表明，该海带提取物可能具有调节多巴胺和血清素的传递、从而影响神经发育的功能。
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